MUHAMMAD SHIDIQ RUKMAN, - (2024) PEMURNIAN PROTEIN NANOBODI KORTISOL DARI Escherichia coli BL21 (DE3) DENGAN METODE IMMOBILIZED METAL AFFINITY CHROMATOGRAPHY DALAM KONDISI NATIF DAN DENATURASI. Skripsi thesis, Sekolah Tinggi Farmasi Indonesia.
![[img]](http://repository.stfi.ac.id/style/images/fileicons/text.png) |
Text
S_PSSF_A223007_Title.pdf Download (737kB) |
|
Text
S_PSSF_A223007_Chapter1.pdf Restricted to Repository staff only Download (230kB) |
|
Text
S_PSSF_A223007_Chapter2.pdf Restricted to Repository staff only Download (450kB) |
|
Text
S_PSSF_A223007_Chapter3.pdf Restricted to Repository staff only Download (344kB) |
|
Text
S_PSSF_A223007_Chapter4.pdf Restricted to Repository staff only Download (544kB) |
|
Text
S_PSSF_A223007_Chapter5.pdf Restricted to Repository staff only Download (212kB) |
|
Text
S_PSSF_A223007_Appendix.pdf Restricted to Repository staff only Download (792kB) |
Abstract
Nanobodi (Nb) merupakan suatu antibodi yang dapat mendeteksi kortisol, proses penyiapan Nb sebagai agen pendeteksi memerlukan berbagai tahapan salah satunya pemurnian. Immobilized metal affinity chromatography (IMAC) menjadi metode yang memanfaatkan histag pada Nb untuk memperoleh Nb dengan kemurnian tinggi. Pemurnian dapat dilakukan pada kondisi natif maupun denaturasi karena histag tidak memerlukan konformasi yang spesifik untuk berikatan dengan Ni-NTA (Nikel-Nitrilotriacetic acid). Penelitian ini bertujuan untuk memperoleh Nb murni dengan kadar optimum berdasarkan SDS-PAGE dan uji Bradford serta mengetahui pengaruh perbedaan kondisi pemurnian pada kondisi natif dan denaturasi. Penelitian ini diawali dengan transformasi pET28a-Nb mutan pada inang E. coli BL21 (DE3), ekspresi protein Nb dengan induksi IPTG, pemurnian menggunakan metode IMAC, konfirmasi hasil dengan SDS-PAGE dan uji Bradford. Hasil penelitian menunjukan bahwa keberadaan Nb murni ditunjukan dengan pita tunggal berukuran 11-17 kDa berdasarkan SDS-PAGE, kadar optimum diperoleh pada kondisi denaturasi sebanyak 211,286 dan 224,143 ppm sedangkan kondisi natif sebesar 152,714 ppm. Kondisi pemurnian yang berbeda memberikan pengaruh terhadap kemudahan histag untuk berikatan dengan Ni-NTA, protein dalam bentuk kumparan rantai polipeptida (kondisi denaturasi) dapat meningkatkan kemampuan pengikatan histag dengan Ni-NTA dibandingkan dalam bentuk terlipat (kondisi natif). Kondisi denaturasi memberikan perolehan protein Nb murni dengan jumlah yang lebih banyak dibandingkan pemurnian pada kondisi natif. ---- Nanobody (Nb) is an antibody that can detect cortisol, the process of preparing Nb as a detection agent requires various stages including purification. Immobilized metal affinity chromatography (IMAC) is a method that utilizes the histag on Nb to obtain Nb with high purity. Purification can be done in native or denaturation conditions as the histag does not require a specific conformation to bind to the NiNTA (Nikel-Nitrilotriacetic acid). The research is aimed at obtaining pure Nb at optimal rates based on SDS-PAGE and Bradford tests as well as finding out the impact of differences in purification conditions on native and denaturation conditions. The research began with transformation of pET28a-Nb mutant in E. coli BL21 (DE3), Nb protein expression with IPTG induction, purification using IMAC method, confirmation of results with SDS-PAGE and Bradford test. The results showed that the existence of pure Nb is demonstrated with a single band 11-17 kDa based on SDS-PAGE, optimum rates obtained in denaturation conditions of 211,286 and 224,143 ppm while native conditions of 152,714 ppm. Different purification conditions influence the histage's ease of binding to Ni-NTA, protein in the form of polypeptide chain (denaturation condition) can enhance the binding capacity of histages to Ni-NTA compared to in folding form (kondisi natif). The denaturation condition provides the acquisition of pure Nb protein in larger quantities than purification in native conditions.
| Item Type: | Thesis (Skripsi) |
|---|---|
| Uncontrolled Keywords: | nanobodi, pemurnian, IMAC, kondisi natif, kondisi denaturasi. ---- nanobody, purification, IMAC, native condition, denaturing condition. |
| Subjects: | Q Science > Q Science (General) R Medicine > R Medicine (General) |
| Divisions: | Program Studi S1 Farmasi |
| Depositing User: | pustakawan - - |
| Date Deposited: | 19 Aug 2024 07:22 |
| Last Modified: | 19 Aug 2024 07:22 |
| URI: | http://repository.stfi.ac.id/id/eprint/960 |
Actions (login required)
 |
View Item |
