KLONING GEN NANOBODI PENDETEKSI KORTISOL

ADIN PURNOMO ZENDRATO, - (2024) KLONING GEN NANOBODI PENDETEKSI KORTISOL. Skripsi thesis, Sekolah Tinggi Farmasi Indonesia.

	Text S_PSSF_A223009_Title.pdf Download (380kB)
	Text S_PSSF_A223009_Chapter1.pdf Restricted to Repository staff only Download (119kB)
	Text S_PSSF_A223009_Chapter2.pdf Restricted to Repository staff only Download (543kB)
	Text S_PSSF_A223009_Chapter3.pdf Restricted to Repository staff only Download (189kB)
	Text S_PSSF_A223009_Chapter4.pdf Restricted to Repository staff only Download (319kB)
	Text S_PSSF_A223009_Chapter5.pdf Restricted to Repository staff only Download (35kB)
	Text S_PSSF_A223009_Appendix.pdf Restricted to Repository staff only Download (216kB)

Abstract

Nanobodi adalah antibodi domain tunggal yang berasal dari camelid (alpaka, llama, unta) dan hanya memiliki rantai berat. Gen nanobodi dapat diperbanyak melalui teknik PCR, kemudian disisipkan ke dalam vektor kloning untuk diperbanyak. Dalam PCR, beberapa aspek dapat dioptimalkan untuk meningkatkan efisiensi dan hasil amplifikasi DNA target. Penelitian ini bertujuan mengetahui desain primer dan suhu annealing yang optimal serta mengkloning gen nanobodi ke dalam vektor plasmid pGEM-T. Hasil penelitian mendapatkan dua pasang primer yaitu NbCor 1 dengan penambahan sisi restriksi NcoI pada primer forward (5'-GAT ATA CCA TGG GCC AGG-3') dan tanpa penambahan NdeI pada primer reverse (5'-CCA CCA GTC ATG CTA GCC A-3'), dan NbCor 2 dengan penambahan sisi restriksi NcoI pada primer forward (5'-GAT ATA CCA TGG GCC AGG TTC-3') dan primer reverse dengan penambahan NdeI (5'-CCA CCA GTC ATG CTA GCC ATA TG-3'), yang dimana pada kedua pasang primer memiliki nilai Tm dan persentase GC yang sesuai persyaratan. Setelah dilakukan optimasi variasi suhu annealing pada kedua primer, diketahui NbCor 2 dengan suhu 52°C terbukti paling optimal karena menghasilkan pita DNA yang tebal dan lebih jelas sekitar 400 bp, sesuai dengan target. Amplicon NbCor 2 pada suhu 52°C berhasil diligasikan ke dalam vektor pGEM-T dan ditransformasikan ke dalam E. coli TOP 10. Keberhasilan kloning gen nanobodi dibuktikan dengan munculnya koloni putih pada hasil transformasi. ---- Nanobodies are single-domain antibodies derived from camelids (alpacas, llamas, camels) and consist only of a heavy chain. Nanobody genes can be amplified through PCR and then inserted into a cloning vector for further replication. In PCR, several aspects can be optimized to improve the efficiency and yield of the target DNA amplification. This study aimed to determine the optimal primer design and annealing temperature, as well as to clone the nanobody gene into the pGEM-T plasmid vector. The results yielded two pairs of primers: NbCor 1, with an NcoI restriction site added to the forward primer (5'-GAT ATA CCA TGG GCC AGG3') but no NdeI site added to the reverse primer (5'-CCA CCA GTC ATG CTA GCC A-3'), and NbCor 2, with an NcoI site added to the forward primer (5'-GAT ATA CCA TGG GCC AGG TTC-3') and an NdeI site added to the reverse primer (5'- CCA CCA GTC ATG CTA GCC ATA TG-3'). Both primer pairs had melting temperature (Tm) and GC content that met the necessary requirements. After optimizing the annealing temperature for both primers, NbCor 2 with an annealing temperature of 52°C proved to be the most optimal, as it produced a clear and thick DNA band of approximately 400 bp, matching the target. The NbCor 2 amplicon at 52°C was successfully ligated into the pGEM-T vector and transformed into E. coli TOP 10. The success of the nanobody gene cloning was confirmed by the appearance of white colonies in the transformation results.

Item Type:	Thesis (Skripsi)
Uncontrolled Keywords:	kloning, kortisol, nanobodi, PCR, transformasi. ---- cloning, cortisol, nanobodies, PCR, transformation.
Subjects:	Q Science > Q Science (General) Q Science > QR Microbiology
Divisions:	Program Studi S1 Farmasi
Depositing User:	pustakawan - -
Date Deposited:	04 Nov 2024 02:59
Last Modified:	04 Nov 2024 02:59
URI:	http://repository.stfi.ac.id/id/eprint/1462

Actions (login required)

View Item