EKSPRESI ALFA-AMILASE Saccharomycopsis fibuligera R64 MUTAN DALAM INANG Pichia pastoris GALUR SMD1168 DENGAN KONSENTRASI PENGINDUKSI METANOL 1,5%

CLARA CLAUDIA, - (2023) EKSPRESI ALFA-AMILASE Saccharomycopsis fibuligera R64 MUTAN DALAM INANG Pichia pastoris GALUR SMD1168 DENGAN KONSENTRASI PENGINDUKSI METANOL 1,5%. Skripsi thesis, Sekolah Tinggi Farmasi Indonesia.

	Text S_PSSF_A191010_Title.pdf Download (318kB)
	Text S_PSSF_A191010_Chapter1.pdf Restricted to Repository staff only Download (68kB)
	Text S_PSSF_A191010_Chapter2.pdf Restricted to Repository staff only Download (176kB)
	Text S_PSSF_A191010_Chapter3.pdf Restricted to Repository staff only Download (101kB)
	Text S_PSSF_A191010_Chapter4.pdf Restricted to Repository staff only Download (124kB)
	Text S_PSSF_A191010_Chapter5.pdf Restricted to Repository staff only Download (60kB)
	Text S_PSSF_A191010_Appendix.pdf Restricted to Repository staff only Download (96kB)

Abstract

Alfa-amilase adalah enzim yang banyak digunakan di industri, khususnya industri berbasis pati yang memiliki massa molekul ~54 kDa. Telah digunakan sebagai penghantaran terapi sebagai obat membantu pencernaan yang memiliki efek antiinflamasi. Saccharomycopsis fibuligera R64 telah teridentifikasi sebagai ragi penghasil alfa-amilase yang memiliki aktivitas amilolitik terbaik, sayangnya belum mampu mendegradasi pati mentah. Salah satu upaya yang dapat dilakukan adalah membuat enzim ini memiliki absorptivitas yang tinggi terhadap substrat. Desain struktur Sfamy R64 mutan dengan menambahkan sisi pengikatan di permukaan secara in silico sebelumnya sudah dilakukan. Oleh karena itu, dibutuhkan alfa amilase yang mampu memecah pati mentah pada suhu yang lebih rendah untuk menurunkan biaya produksi. Teknologi DNA rekombinan merupakan alternatif untuk memproduksi alfa-amilase. Pada tahap ekspresi digunakan inang Pichia pastoris karena memiliki tingkat ekspresi yang tinggi dan modifikasi pasca translasi. Tujuan penelitian ini adalah ekspresi Sfamy R64 mutan pada inang P. pastoris dan mengkarakterisasi serta menguji aktivitasnya. Metode penelitian yang dilakukan adalah ekspresi Sfamy R64 mutan dengan konsentrasi penginduksi metanol 1,5% selama 144 jam, kemudian mengkarakterisasi dengan elektroforesis SDS-PAGE dan menguji aktivitasnya dengan metode Fuwa. Hasil dari penelitian ini adalah Sfamy R64 mutan dapat terekspresikan dengan adanya pita pada elektroforesis SDS-PAGE dengan berat molekul ~54 kDa dan memiliki aktivitas paling tinggi pada waktu induksi 0 jam dengan aktivitas 25.31 U/mL. --- Alpha-amylase is an enzyme that is widely used in industry, especially in starch�based industries which has a molecular mass of ~54 kDa. It has been used as a therapeutic delivery as a digestive aid that has anti-inflammatory effects. Saccharomycopsis fibuligera R64 has been identified as an alpha-amylase producing yeast that has the best amylolytic activity, unfortunately it has not been able to degrade raw starch. One effort that can be done is to make this enzyme have a high absorptivity of the substrate. Sfamy R64 mutant structural design by adding an in silico surface binding site has previously been carried out. Therefore, alpha amylase is needed which is able to break down raw starch at lower temperatures to reduce production costs. Recombinant DNA technology is an alternative to produce alpha-amylase. At the expression stage, Pichia pastoris host was used because it has a high level of expression and post-translational modification. The aim of this study was the expression of mutant Sfamy R64 in P. pastoris hosts and to characterize and test its activity. The research method used was the expression of mutant Sfamy R64 with an inducing concentration of 1.5% methanol for 144 hours, then characterized by SDS-PAGE electrophoresis and tested for its activity by the Fuwa method. The results of this study were that the Sfamy R64 mutant could be expressed in the presence of a band on SDS-PAGE electrophoresis with a molecular weight of ~54 kDa and had the highest activity at induction time of 0 hours with an activity of 25.31 U/mL.

Item Type:	Thesis (Skripsi)
Uncontrolled Keywords:	Alfa-amilase, Sfamy R64 mutan, Pichia pastoris, SDS-PAGE, metode Fuwa Alpha-amylase, Sfamy R64 mutant, Pichia pastoris, SDS-PAGE, Fuwa method
Subjects:	Q Science > Q Science (General) R Medicine > RS Pharmacy and materia medica
Divisions:	Program Studi S1 Farmasi
Depositing User:	pustakawan - -
Date Deposited:	14 Jun 2024 08:35
Last Modified:	26 Jun 2024 01:30
URI:	http://repository.stfi.ac.id/id/eprint/211

Actions (login required)

View Item