SINTYA BUNGAN SOMA LANGI, - (2024) PEMURNIAN PROTEIN ALFA-AMILASE Saccharomycopsis fibuligera R64 MUTAN YANG DIEKSPRESIKAN DALAM INANG Pichia pastoris MELALUI KROMATOGRAFI AFINITAS DENGAN KONDISI DENATURASI. Skripsi thesis, Sekolah Tinggi Farmasi Indonesia.
![[img]](http://repository.stfi.ac.id/style/images/fileicons/text.png) |
Text
S_PSSF_A223021_Title.pdf Download (273kB) |
|
Text
S_PSSF_A 223 021_Chapter1.pdf Restricted to Repository staff only Download (35kB) |
|
Text
S_PSSF_A 223 021_Chapter2.pdf Restricted to Repository staff only Download (202kB) |
|
Text
S_PSSF_A 223 021_Chapter3.pdf Restricted to Repository staff only Download (193kB) |
|
Text
S_PSSF_A 223 021_Chapter4.pdf Restricted to Repository staff only Download (277kB) |
|
Text
S_PSSF_A 223_021_Chapter5.pdf Restricted to Repository staff only Download (12kB) |
|
Text
S_PSSF_A223021_Appendix.pdf Restricted to Repository staff only Download (610kB) |
Abstract
Alfa-amilase merupakan enzim yang dapat memecah pati menjadi gula dan banyak digunakan di industri, khususnya industri berbasis pati yang memiliki massa molekul ~54 kDa. Teknologi DNA rekombinan merupakan alternatif untuk memproduksi alfa-amilase. Pada tahap ekspresi digunakan inang Pichia pastoris karena memiliki tingkat ekspresi yang tinggi dan modifikasi pasca translasi. Pemurnian protein rekombinan merupakan salah satu cara untuk mendapatkan enzim dalam bentuk yang aktif dan murni. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui kemurnian protein alfa-amilase yang diperoleh setelah dimurnikan dengan kromatografi afinitas dalam kondisi terdenaturasi. Metode penelitian yang dilakukan adalah ekspresi Sfamy R64 mutan dengan konsentrasi penginduksi metanol 1,5% selama 144 jam, kemudian mengkarakterisasi dengan elektroforesis SDS-PAGE, memurnikan protein dengan kromatografi afinitas pada kondisi denaturasi, menentukan kemurnian dan mengukur intensitas pita protein menggunakan software ImageJ. Hasil dari penelitian ini menunjukkan bahwa keberadaan alfa-amilase setelah dimurnikan ditunjukkan dengan pita tunggal berukuran sekitar ~48 kDa berdasarkan SDS-PAGE dengan intensitas pita sebesar 187,35. Kemurnian protein dalam sampel mencapai 1,44 % yang menunjukkan keberhasilan pemurnian enzim alfa-amilase. ------ Alpha-amylase is an enzyme that can break down starch into sugar and is widely used in industry, especially starch-based industries which has a molecular mass of ~54 kDa. Recombinant DNA technology is an alternative to produce alphaamylase. At the expression stage, Pichia pastoris host was used because it has a high level of expression and post-translational modification. Purification of recombinant proteins is one way to obtain enzymes in an active and pure form. The aim of this study was to determine the purity of alpha-amylase protein obtained after purification by affinity chromatography under denatured conditions. The research method used was the expression of Sfamy R64 mutant with a methanol inducer concentration of 1.5% for 144 hours, then characterizing it with SDS-PAGE electrophoresis, purifying the protein with affinity chromatography under denaturing conditions, determining the purity and measuring the intensity of the protein band using ImageJ software. The results of this study indicate that the presence of alpha-amylase after purification is indicated by a single band measuring around ~48 kDa based on SDS-PAGE with a band intensity of 187.35. The purity of the protein in the sample reached 1,44% which indicates the success of the purification of the alpha-amylase enzyme.
| Item Type: | Thesis (Skripsi) |
|---|---|
| Uncontrolled Keywords: | Alfa-amilase, Pichia pastoris, Pemurnian Kromatografi Afinitas, SDS-PAGE, Software ImageJ. ----- Alpha-amylase, Pichia pastoris, Affinity Chromatography Purification, SDS-PAGE, ImageJ Software |
| Subjects: | Q Science > Q Science (General) |
| Divisions: | Program Studi S1 Farmasi |
| Depositing User: | pustakawan - - |
| Date Deposited: | 14 Nov 2024 01:55 |
| Last Modified: | 14 Nov 2024 01:55 |
| URI: | http://repository.stfi.ac.id/id/eprint/1490 |
Actions (login required)
 |
View Item |
