SILVANA MARWANI BUNTU SALEKO, - (2024) OPTIMASI EKSPRESI PROTEIN NANOBODI KORTISOL OLEH BAKTERI Escherichia coli BL21 (DE3) DENGAN VARIASI KONSENTRASI IPTG, SUHU, DAN WAKTU INKUBASI MENGGUNAKAN METODE TAGUCHI. Skripsi thesis, Sekolah Tinggi Farmasi Indonesia.
![[img]](http://repository.stfi.ac.id/style/images/fileicons/text.png) |
Text
S_PSSF_A223006_Title.pdf Download (326kB) |
|
Text
S_PSSF_A223006_Chapter1.pdf Restricted to Repository staff only Download (112kB) |
|
Text
S_PSSF_A223006_Chapter2.pdf Restricted to Repository staff only Download (87kB) |
|
Text
S_PSSF_A223006_Chapter3.pdf Restricted to Repository staff only Download (233kB) |
|
Text
S_PSSF_A223006_Chapter4.pdf Restricted to Repository staff only Download (372kB) |
|
Text
S_PSSF_A223006_Chapter5.pdf Restricted to Repository staff only Download (11kB) |
|
Text
S_PSSF_A223006_Appendix.pdf Restricted to Repository staff only Download (401kB) |
Abstract
Nanobodi (Nb) merupakan antibodi berukuran kecil dengan potensi besar sebagai agen deteksi kortisol, produksi Nb dapat dilakukan dengan cara ekspresi dengan menghasilkan protein yang optimal untuk kit diagnostik melalui kombinasi metode Taguchi. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan optimasi produksi protein Nb kortisol dalam Escherichia coli (E.coli) BL21 (DE3) menggunakan metode Taguchi yang dapat memberikan kombinasi variasi ekspresi yang dilakukan. Metode Taguchi digunakan untuk mendapatkan variasi optimasi produksi. Ekspresi dimulai dengan mentransformasikan plasmid pET28a-Nb kedalam inang E.coli BL21 (DE3) yang kemudian diinduksi IPTG dan hasilnya dianalisis melalui SDS-PAGE dan ImageJ. Berdasarkan hasil metode Taguchi terdapat 4 kombinasi yang optimum yaitu, kondisi 1 (0,6 mM;25°C;18 jam), kondisi 2 (0,6 mM;37°C;24 jam), kondisi 3 (0,8 mM;25°C;24 jam), dan kondisi 4 (0,8 mM;37°C;18 jam). Hasil ekspresi protein menunjukkan bobot pelet (0,1 gram;0,08 gram;0,07 gram;0,06 gram) secara berurutan sesuai dengan kondisinya. Hasil SDSPAGE menunjukkan adanya pita tunggal yang berukuran 12-15 kDa sesuai dengan ukuran Nb yang diharapkan. Hasil analisis Imagej menunjukkan nilai intensitas (1123361 kB, 1043651 kB, 1116557 kB, 632916 kB) secara berurutan sesuai dengan kondisinya. Dari hasil ini didapatkan hasil yang paling optimal terdapat pada kondisi 1 yaitu, (konsentrasi IPTG 0,6 mM;Suhu 25°C;Waktu Inkubasi 18 jam) dengan menghasilkan bobot pelet sebanyak 0,1 gram dengan analisis SDS-PAGE menunjukkan pada rentang 12-15 kDa dan pada analisis ImageJ nilai intensitas sebesar 1123361 kB. ----- Nanobodies (Nbs) are small-sized antibodies with significant potential for cortisol detection. To produce Nbs suitable for diagnostic kits, expression optimization is crucial. This study aimed to optimize the production of cortisol Nb protein in Escherichia coli (E. coli) BL21 (DE3) using the Taguchi method to generate various expression combinations. The Taguchi method was employed to identify optimal conditions for Nb production. The pET28a-Nb plasmid was transformed into E. coli BL21 (DE3), followed by IPTG induction. Expression levels were analyzed using SDS-PAGE and ImageJ. Four optimal combinations were identified: condition 1 (0.6 mM IPTG, 25°C, 18 hours), condition 2 (0.6 mM IPTG, 37°C, 24 hours), condition 3 (0.8 mM IPTG, 25°C, 24 hours), and condition 4 (0.8 mM IPTG, 37°C, 18 hours). Pellet weights were 0.1 g, 0.08 g, 0.07 g, and 0.06 g, respectively. SDS-PAGE showed a single band at 12-15 kDa, consistent with the expected size of Nb. ImageJ analysis revealed intensities of 1123361 bits, 1043651 bits, 1116557 bits, and 632916 bits, respectively. Condition 1 (0.6 mM IPTG, 25°C, 18 hours) yielded the highest pellet weight (0.1 g), a single band on SDS-PAGE at 12-15 kDa, and the highest intensity on ImageJ (1123361 bits), indicating the most optimal expression conditions.
| Item Type: | Thesis (Skripsi) |
|---|---|
| Uncontrolled Keywords: | nanobodi, Taguchi, protein, IPTG, optimasi. ---- nanobody, Taguchi, protein, IPTG, optimization |
| Subjects: | Q Science > Q Science (General) Q Science > QH Natural history > QH301 Biology |
| Divisions: | Program Studi S1 Farmasi |
| Depositing User: | pustakawan - - |
| Date Deposited: | 14 Nov 2024 01:43 |
| Last Modified: | 14 Nov 2024 01:43 |
| URI: | http://repository.stfi.ac.id/id/eprint/1489 |
Actions (login required)
 |
View Item |
