DESAIN PLASMID REKOMBINAN PET28A-SUMO NANOBODI

NUSHI CHAIRUNNISA RESMANA, - (2021) DESAIN PLASMID REKOMBINAN PET28A-SUMO NANOBODI. Skripsi thesis, Sekolah Tinggi Farmasi Indonesia.

	Text S_PSSF_A171093_Title.pdf Download (4MB)
	Text S_PSSF_A171093_Chapter1.pdf Restricted to Repository staff only Download (1MB)
	Text S_PSSF_A171093_Chapter2.pdf Restricted to Repository staff only Download (4MB)
	Text S_PSSF_A171093_Chapter3.pdf Restricted to Repository staff only Download (987kB)
	Text S_PSSF_A171093_Chapter4.pdf Restricted to Repository staff only Download (3MB)
	Text S_PSSF_A171093_Chapter5.pdf Restricted to Repository staff only Download (252kB)
	Text S_PSSF_A171093_Appendix.pdf Restricted to Repository staff only Download (1MB)

Abstract

Nanobodi merupakan fragmen antibodi yang ditemukan pada camelia dengan kemampuannya dapat mengikat secara selektif dengan antigen tertentu, memiliki kapasitas penetrasi jaringan yang sangat baik dan dapat dengan mudah dimodifikasi untuk tujuan diagnostik atau terapeutik karena ukuran molekulnya yang lebih kecil dari antibodi konvensional. Nanobodi juga memiliki ketahanan terhadap pelarut organik, kelarutannya yang lebih tinggi, dan mudah diekspresi. Menurut hasil penelitian ding dkk., nanobodi dapat berikatan kuat dengan kortisol sehingga bisa dijadikan salah satu komponen untuk kit diagnostik kortisol. Penelitian ini bertujuan untuk konstruksi dna rekombinan nanobodi menggunakan pET28a-SUMO. Urutan asam amino nanobodi yang digunakan diambil dari PDB dengan kode 6ITP yang kemudian ditranslasikan balik menjadi DNA dan dianalisis kodonnya menggunakan GCUA serta dianalisis sisi restriksinya menggunakan Nebcutter. Perbanyakan gen nanobodi dilakukan dengan desain primer yang ditambahkan sisi restriksi BamHI dan HindIII sesuai dengan peta plasmid pET28a-SUMO. Analisis insersi gen nanobodi dengan plasmid pET28a- SUMO dilihat dengan cara menganalisis inframe atau tidaknya antara nanobodi dan plasmid pET28a-SUMO dengan kesesuaian urutan asam amino nanobodi yang tetap sama. Hasil penelitian yang diperoleh yaitu pasangan primer (primer forward 5'-GGATCCCAGGTTCAGCTGCAGGAA-3 dengan primer reverse 5'- GCAAGCTTGTCAGCTGCTAACGGTAAC-3') dan plasmid rekombinan yang diperoleh sebesar 5989bp, dimana gen target (nanobodi) dinyatakan dapat disisipkan ke dalam plasmid (pET28a-SUMO) secara inframe tanpa mengubah pembacaan asam aminonya sehingga dapat diekspresikan pada Escherichia coli. --- Nanobodies are antibody fragments found in camellias with the ability to selectively bind to certain antigens, have excellent tissue can easily penetration capacity and be used for diagnostic purposes or because of the smaller molecular size of conventional antibodies. Nanobodies also have resistance to organic solvents, higher solubility, and easy expression. According to the results of research by ding et al., nanobodies can bind strongly to cortisol so that it can be used as a component for a cortisol diagnostic kit. This study aims to construct recombinant DNA nanobodies using pET28a-SUMO. The amino acid sequence of the nanobodies used was from PDB with the code 6ITP which was then translated into DNA and analyzed for codons using GCUA and the restriction side was analyzed using Nebcutter. The nanobody gene propagation was carried out by using a primer design with the addition of restriction sites BamHI and HindIII according to the pET28a-SUMO plasmid map. The analysis of the insertion of the nanobody gene with the pET28a-SUMO plasmid was seen by analyzing the inframe or not between the nanobody and the pET28a-SUMO plasmid with the amino acid sequence of the nanobody remained the same. The results obtained are the primer pair (forward primer 5'-GGATCCCAGGTTCAGCTGCAGGAA-3' with reverse primer 5'-GCAAGCTTGTCAGCTGCTAACGGTAAC-3') and recombinant plasmid obtained at 59896p, where the target gene (nanobody) can be inserted into the plasmid (pET28a). -SUMO) in the infrared without changing the amino acid reading so that it can be expressed in Escherichia coli.

Item Type:	Thesis (Skripsi)
Uncontrolled Keywords:	Nanobodi, kortisol, primer, pET28a-SUMO, DNA rekombinan --- Nanobodies, cortisol, primary, pET28a-SUMO, recombinant DNA.
Subjects:	Q Science > Q Science (General)
Divisions:	Program Studi S1 Farmasi
Depositing User:	pustakawan - -
Date Deposited:	07 Sep 2024 01:42
Last Modified:	07 Sep 2024 01:42
URI:	http://repository.stfi.ac.id/id/eprint/1159

Actions (login required)

View Item